miR26b与静脉高压预后评估张群 [复制链接]

张群李涛张礼杏

目的探究ｍｉＲ-２６ｂ在肝硬化门静脉高压预后评估中的价值。方法选择２０１７年１月至２０１８年１２医院确诊为肝硬化门静脉高压的１２７例患者作为研究对象。采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测患者血清中ｍｉＲ-２６ｂ的表达水平，并分析其与肝硬化门静脉高压患者预后的关系。结果１２７例肝硬化门静脉高压患者中共有５３例（４１．７３％）预后不良。预后不良组患者的年龄、慢性丙型肝炎占比、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级Ｂ级占比、肌酐和胆红素水平均高于预后良好组，差异均有统计学意义（犘均＜０．０５）。预后不良组患者血清中ｍｉＲ-２６ｂ的相对表达量低于预后良好组，差异有统计学意义（犘＜０．０５）。ｍｉＲ-２６ｂ评估肝硬化门静脉高压患者预后的受试者工作特征（ＲＯＣ）曲线下面积（ＡＵＣ）、敏感度和特异度分别为０．８３８（９５％犆犐：０．７６２～０．８９８）、６４．１５％和８７．８４％。多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析结果显示，年龄、肝硬化病因、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级及ｍｉＲ-２６ｂ相对表达量与肝硬化门静脉高压患者的预后密切相关（犘＜０．０５）。结论肝硬化门静脉高压预后不良患者的血清ｍｉＲ-２６ｂ表达水平较低。检测肝硬化门静脉高压患者血清ｍｉＲ-２６ｂ表达水平有利于评估患者的预后情况。

门静脉高压是肝硬化患者较为严重的并发症之一，可诱发食管胃底静脉曲张破裂出血、顽固性腹水、自发性细菌性腹膜炎、脾功能亢进及肝性脑病等，甚至可导致死亡［１-３］。门静脉压力在肝硬化门静脉高压患者的预后评估中具有重要意义［４］。肝静脉压力梯度与门静脉压力梯度有较高的相关性，被认为是反映门静脉压力的金标准［５-６］。但由于肝静脉压力梯度检查为有创性检查，且费用昂贵，暂未在临床上推广应用［７］。因此，探究反映肝硬化门静脉高压患者预后的生物标志物意义重大。有研究表明，ｍｉＲ-２６ｂ过表达可靶向人类平衡型核苷转运蛋白１，抑制Ｒｈｏ亚家族蛋白Ａ／Ｒｈｏ相关卷曲螺旋形成蛋白激酶１信号转导通路表达，降低经胆总管结扎诱导的肝硬化门静脉高压大鼠的门静脉压力，并改善肝纤维化［８］。目前关于ｍｉＲ-２６ｂ在肝硬化门静脉高压患者血清中的表达水平及其与预后关系的报道较少。本文对此开展研究，以期为肝硬化门静脉高压的预后评估提供帮助。

１资料与方法

１．１一般资料选择２０１７年１月至２０１８年１２医院确诊为肝硬化门静脉高压的１２７例患者作为研究对象。参照《肝硬化门静脉高压食管胃静脉曲张出血防治指南（２０１５）》［９］对患者进行诊断。纳入标准：（１）有慢性乙型肝炎病毒、慢性丙型肝炎病毒感染史，感染时间长于６个月；（２）首次经影像学检查或肝活组织病理学检查确诊为肝硬化，并伴有门静脉高压；（３）签署了知情同意书。排除标准：（１）门静脉高压性胃肠病；（２）严重肝、肾功能障碍；（３）合并严重感染；（４）先天性肝内胆管囊性扩张或胆道阻塞性扩张；（５）合并恶性肿瘤。１２７例肝硬化门静脉高压患者中男性８５例，女性４２例，年龄为２８～７０岁，平均年龄为（５３．５９±８．５４）岁；其中慢性乙型肝炎患者１１４例，慢性丙型肝炎患者１３例。本研究经本院医学伦理委员会批准。

１．２临床资料收集收集受试者的年龄、性别、肝硬化病因、ＣｈｉｌｄＰｕｇｈ分级、肌酐、白蛋白、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）和胆红素水平。采用７６００型全自动生化分析仪（日本日立公司）检测肌酐水平，采用酶联免疫吸附法检测ＡＬＴ和ＡＳＴ水平，采用免疫比浊法检测白蛋白水平，采用钒酸盐氧化法检测胆红素水平。

１．３血清ｍｉＲ２６ｂ表达水平检测采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测所有患者血清中ｍｉＲ２６ｂ的表达水平［１０］。步骤如下：（１）抽取患者晨起肘部静脉血１０ｍＬ，３５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ（离心半径８ｃｍ），提取离心后上清液；（２）将Ｔｒｉｚｏｌ试剂滴加至上清液中，提取血清中总ＲＮＡ；（３）用紫外分光光度计检测总ＲＮＡ纯度；（４）将总ＲＮＡ加至ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｒＦｉｒｓｔＳｔａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ反转录试剂盒中进行反转录反应，获取ｃＤＮＡ；（５）用ＰＣＲ仪扩增ｃＤＮＡ，反应条件为９５℃预变性５ｍｉｎ，之后９５℃３０ｓ，６０℃３０ｓ，７２℃１５ｓ，共计４０个循环。以ＧＡＰＤＨ作为内参，采用２－ΔΔＣｔ表示ｍｉＲ-２６ｂ的相对表达量。引物序列见表１。

１．４预后随访及评价采用电话随访、复诊等方式了解肝硬化门静脉高压患者的预后情况。于患者出院后１个月开始随访，末次随访时间为２０１９年１２月２３日。本研究将食管胃底静脉曲张破裂出血、中量或高量腹腔积液（＞５００ｍＬ）、自发性腹膜炎、肝性脑病及上述并发症诱发的死亡定义为预后不良。

１．５统计学分析采用ＳＰＳＳ２４．０软件进行统计学分析。正态分布的计量资料用均数±标准差（狓珔±狊）表示，两组间比较采用独立样本狋检验。计数资料用例（％）表示，组间比较采用χ２检验。采用受试者工作特征（ＲＯＣ）曲线评价ｍｉＲ-２６ｂ诊断肝硬化门静脉高压患者预后的价值。采用多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析影响肝硬化门静脉高压患者预后的相关因素。犘＜０．０５为差异有统计学意义。

２结果

２．１预后良好组与预后不良组的基本资料比较１２７例肝硬化门静脉高压患者中共有５３例（４１．７３％）预后不良，其中食管胃底静脉曲张破裂出血４４例（３４．６５％），中量腹腔积液５例（３．９４％），高量腹腔积液２例（１．５７％），并发自发性腹膜炎２例（１．５７％）。两组患者在性别、白蛋白、ＡＬＴ和ＡＳＴ水平方面比较，差异均无统计学意义（犘均＞０．０５）。预后不良组患者的年龄、慢性丙型肝炎占比、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级Ｂ级占比、肌酐和胆红素水平均高于预后不良组，差异均有统计学意义（犘均＜０．０５）。见表２。

２．２两组血清中ｍｉＲ-２６ｂ表达水平比较预后不良组患者血清中ｍｉＲ２６ｂ相对表达量为４．３０±１．２９，低于预后良好组（６．３１±１．５６），差异有统计学意义（狋＝７．６９１，犘＜０．００１）。２．３ｍｉＲ２６ｂ评估肝硬化门静脉高压患者预后的价值ｍｉＲ-２６ｂ评估肝硬化门静脉高压患者预后的ＲＯＣ曲线下面积（ＡＵＣ）为０．８３８（９５％犆犐：０．７６２～０．８９８），最大约登指数为０．５２０，其所对应的最佳截断点、敏感度和特异度分别为４．５２、６４．１５％和８７．８４％。见图１。２．４影响肝硬化门静脉高压患者预后的相关因素分析将肝硬化门静脉高压患者的预后情况作为因变量，将可能影响肝硬化门静脉高压患者预后的相关因素如年龄、肝硬化病因、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级、肌酐、胆红素和ｍｉＲ-２６ｂ相对表达量作为自变量纳入多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析（纳入标准为单因素分析中犘＜０．０５），结果显示年龄、肝硬化病因、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级及ｍｉＲ-２６ｂ相对表达量与肝硬化门静脉高压患者的预后密切相关（犘＜０．０５），见表３。

３讨论

微ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是一类由１８～２４个核苷酸组成的不具备编码蛋白质功能的单链ＲＮＡ［１１］。据报道，目前已发现多种ｍｉＲＮＡ可参与细胞的增殖、自噬、迁移及凋亡等病理生理过程［１２-１４］。ｍｉＲ２６ｂ作为ｍｉＲＮＡ中一员，已被报道其与乳腺癌［１５］、肺癌［１６］、上皮性卵巢癌［１７］和黑素瘤［１８］等有关。Ｊｉａｎｇ等［１９］研究证实了ｍｉＲ２６ｂ可抑制Ｍｃｌ-１基因表达，加速肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）诱导的肝癌细胞凋亡。目前关于ｍｉＲ２６ｂ与肝硬化门静脉高压患者预后关系的报道较少。本研究采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测肝硬化门静脉高压患者血清ｍｉＲ２６ｂ的表达水平，发现预后不良组患者血清中ｍｉＲ-２６ｂ的相对表达量低于预后良好组，提示血清ｍｉＲ-２６ｂ的表达水平可能与肝硬化门静脉高压患者的预后密切相关。随后，本研究构建了ｍｉＲ-２６ｂ诊断肝硬化门静脉高压患者预后的ＲＯＣ曲线，结果显示ｍｉＲ-２６ｂ评估肝硬化门静脉高压患者预后的ＲＯＣＡＵＣ、敏感度和特异度分别为０．８３８、６４．１５％和８７．８４％，提示ｍｉＲ-２６ｂ对肝硬化门静脉高压患者预后评估具有较高价值，特异度较高，但敏感度较低。为进一步明确ｍｉＲ-２６ｂ与肝硬化门静脉高压患者预后的关系，本研究采用单因素及多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析了可能影响肝硬化门静脉高压患者预后的相关因素，结果显示年龄、肝硬化病因、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级及ｍｉＲ-２６ｂ相对表达量与肝硬化门静脉高压患者的预后密切相关。周昊等［４］研究表明年龄≥６０岁或伴有慢性丙型肝炎的肝硬化门静脉高压患者的门静脉压力较高，推测患者预后不良的原因可能是年龄较大或伴有慢性丙型肝炎肝硬化，两者均会升高门静脉压力，易诱发食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病等并发症。Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级可反映肝脏的损伤情况，对肝硬化患者的预后评估具有重要价值［２０］。ｍｉＲ-２６ｂ相对表达量与肝硬化门静脉高压患者的预后密切相关，推测其原因是ｍｉＲ-２６ｂ过表达可降低胆总管结扎诱导的肝硬化门静脉高压大鼠的门静脉压力，从而改善肝硬化［８］，其表达水平可反映肝脏损伤情况，进而预示患者预后。综上所述，肝硬化门静脉高压预后不良患者的血清ｍｉＲ-２６ｂ表达水平低于预后良好者。检测肝硬化门静脉高压患者血清ｍｉＲ-２６ｂ表达水平有助于评估预后情况。年龄较大、患有慢性丙型肝炎、Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分级为Ｂ级或ｍｉＲ２６ｂ表达水平较低的肝硬化门静脉高压患者的预后不良风险较高。本研究的不足之处在于为单中心研究，纳入的患者均为本地区患者，可能会对研究结果造成一定偏倚，下一步将纳入多地区患者，开展多中心研究。

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